裸鼠成瘤实验方法

1、选择裸鼠

裸大鼠具有移植肿瘤大、取血量多，可行某些外科小手术等优点，比裸小鼠有一定优越性，其缺点是维持经费比裸小鼠高，且裸大鼠在实验中不常用。我们实验室常用的是BALB/c-nu裸小鼠。随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染)，裸鼠体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验一般采用4--6周龄的裸鼠。

2、慢病毒保存

理论上慢病毒可在-80℃保存6个月，在4℃可保存3天。因为慢病毒每次冻融会降低病毒滴度10%，因此慢病毒实验最好是提前分装。

3、选择细胞

3.1国际公认度较高的细胞株。

3.2根据体内生长情况来确定，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始。

4、细胞慢病毒感染

细胞感染达到80%以上所需MOI值，这个大部分细胞是可以查到，不过因为因为慢病毒感染细胞是很灵活的，因此MOI值的选择也是很有差异性的，具体情况具体分析。

5、细胞培养：

细胞状态以及数量是裸鼠皮下成瘤的关键一步。细胞状态良好，对数生长期，接种很容易形成肿瘤，反之则会导致失败。即浪费了细胞，又错过了裸鼠成瘤的最佳时期。

6、细胞接种：

6.1接种的细胞量：无血清培养基重悬成1*107个/ml的悬液，0.2ml/只/针。也就是一只裸鼠最少要用200W个细胞，有的细胞需求可能会达到1000W个/只。

6.2接种的部位大部分颈部和腋下皮下。血丰富，能提供大量的营养。当然，这个也是可以调整的。

6.3另外裸鼠理论上是1个裸鼠只能接种1针，形成1个肿瘤。因为2个或者以上的肿瘤是会相互影响的。

7、裸鼠活体荧光

注意事项：

1. 裸鼠的状态

裸鼠的年龄，如5-7ｗ比9ｗ容易成瘤，因为这时免疫系统不够强；或裸鼠由于试验系统染菌而长毛或感染，则成瘤率可能会受影响

2. 细胞接种量

动物肿瘤一般接种2～600万/只就100%成瘤，而人癌需要1000万以上才能较高的成瘤

3. 细胞状态

肿瘤细胞的活力，生长状态，是否对数生长期，有无污染也对成瘤影响很大