电穿孔转染质粒DNA
实验原理
当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、 RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞内。
材料准备
(1) 缓冲液与溶液PBS缓冲液（参考《分子克隆实验指南》）。
(2) 核酸与寡核苷酸质粒DNA：转染前将所要转的质粒在细胞室内无菌沉淀（1/10体积的3moUL NaAC, 2倍体积的无水乙醇），在超净台中用70％的乙醇（无水乙醇与灭菌水在无菌状态下配制）清洗2次，晾干，加灭菌水溶解。用0. 1×TE（pH 7.6)溶解DNA至终浓度25 μg/ml，每毫升培养基需要50μL质粒溶液。
(3）培养基：为完全培养基。
(4）其他设备电穿孔仪、细胞培养用培养箱（(37℃, 5% CO2的加湿培养箱）、超净台、冰箱、离心机、Vortex振荡器（选用）、1. 5mL EP管、移液器及tip头、试管架、计时器和60mm组织培养皿或12孔板。
(5）细胞：指数生长的哺乳动物细胞培养物。细胞准备：转染前一到两天将细胞传代至平皿中（视目的不同所用平皿规格不同），使细胞密度在做转染时达到所需密度（具体细胞密度视细胞生长速度而定，标准是在收细胞时细胞密度达到100%）。
转染方法
(1）贴壁细胞用胰酶消化后离心（室温，1000r/min, 3min）收集细胞，悬浮细胞直接离心收集细胞。
(2）用无菌PBS重新悬浮细胞，离心（室温，1000r/min, 3min)收集细胞。
(3) 用0. 5 ml无菌PBS重新悬浮细胞，将细胞悬浮液转移至无菌电穿孔小杯中。
(4）加入适量的质粒DNA溶液（DNA溶液浓度1-40μg/ml) ,混匀。
(5）将小杯置于电穿孔仪中，在电穿孔装置上设置输出电压和脉冲宽度，启动装置，供给所需的电脉冲。
(6) 将电脉冲处理过的细胞转移至细胞培养容器（培养皿或培养孔）中，再加入一些完全培养基，将样品细胞放回孵育箱中使之在正常条件下生长。
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